此类产品是科研用途，不属于医疗器械 生长激素释放因子（GH-RF）ELISA试剂盒
（美国DRG*，货号：EIA3429 ）
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预期用途
此试剂盒基于竞争酶免法检测特异性多肽和相关多肽。
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实验原理美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
微孔板预包被有第二抗体，非特异性结合位点封闭，主要抗体的Fab片段竞争结合生物素标记的多肽和标准品或样本中的目的多肽，二抗则与Fc片段结合。生物素标记的多肽与HRP-链霉亲和素反应，催化底物反应，黄色强度直接与生物素标记多肽-HRP-链霉亲和素复合物的量成正比，但是与标准品或样本中的多肽量成反比。根据已知浓度建立标准曲线，样本中未知浓度的多肽浓度可直接从标准曲线上读取。
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试剂盒组成美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
20X的缓冲浓缩液，50ml 微孔板，96孔 封板纸 主要抗血清，兔抗多肽IgG，1支 标准品，1支 生物素标记多肽，1支 HRP-链霉亲和素，30ul 阳性质控，2支 底物液，12ml 终止液，2N盐酸，15ml 坐标纸 说明书
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实验所需材料但试剂盒未提供美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
酶标仪（450nm） 振荡器，300-400rpm 洗板系统 多通道移液器，50-100ul 溶液贮存瓶 吸水纸 采血管（可选） 抑肽酶，0.6TIU/ml血液（可选） 缓冲液A（可选） 缓冲液B（可选） C18分离柱
注意：打开试剂和试验开始前先将其平衡至室温（20-23℃），强烈建议稀释过的溶液尽快使用，采血步骤见盒子内的采血说明书，每个盒子所含成分足够用于96人份检测或40人份的双孔检测。
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实验步骤美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
实验前认真阅读说明书，所有试剂平衡至室温（大约25-45min） 用950ml的去离子水稀释20X的缓冲浓缩液，得到1X的试验缓冲液，用于稀释其他试剂和样本。注意：如果20X的缓冲液出现了结晶，可在水浴锅内加热使其*溶解，使用前*混匀 用1X的缓冲液稀释，离心标准品，振荡。Stock solution的浓度为1000ng/ml，室温下放置至少10min，至*溶解。使用前离心，振荡。美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
标准品准备如下美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。 美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
编号 标准品的量 缓冲液的量 浓度
Stock 1000ul ---- 1000ng/ml
#1 100ul的Stock 900ul 100 ng/ml
#2 100ul的#1 900ul 10 ng/ml
#3 100ul的#2 900ul 1ng/ml
#4 100ul的#3 900ul 0.1 ng/ml
#5 100ul的#4 900ul 0.01 ng/ml
用5ml的1X的缓冲液稀释主要抗体，放置至少5min，至*溶解，*混匀 用5ml的1X的缓冲液稀释生物素标记多肽，放置至少5min，至*溶解，*混匀 200ul的1X缓冲液稀释质控，放置至少5min，至*溶解，*混匀 将A1和A2孔作为空白对照（Blank） 在B1和B2孔内加50ul的1X缓冲液，作为Total Binding 将配制好的标准品由#5到#1各50ul依次加入至C1和C2—G1和G2孔内，注意，标准品需做双份检测 H1和H2孔加入50ul已稀释的阳性质控，注意，阳性质控也要做双孔检测 将50ul样本加入至相应孔内，做双孔检测 除空白孔外（Blank well），每孔加25ul的已稀释的主要抗体 除空白孔外（Blank well），每孔加25ul的已稀释的生物素标记多肽，注意，不建议生物素标记多肽或主要抗血清加样时使用多通道移液器 盖板，室温，300-400rpm下孵育2小时 在3000-5000rpm下将HRP-链霉亲和素离心5秒，然后取12ulSA-HRP和12ul 1X的缓冲液混匀 移取盖板，倒去反应液 每孔350ul 1X缓冲液洗板4次，吸水纸上拍干 每孔加100ul的SA-HRP 盖板，室温，300-400rpm下孵育1小时 移取盖板 同步骤17） 每孔加100ul的TMB底物液 盖板，室温，300-400rpm下孵育1小时 移取盖板，每孔加100ul的2N 盐酸终止反应。溶液颜色由蓝色变黄色，如未出现统一的颜色变化，用手轻轻拍板，使其*混匀，20分钟内进行下一步骤 酶标仪450nm处读数
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结果计算美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
在半对数坐标纸上绘制标准曲线。标准品的浓度为X轴，相应的OD值为Y轴，用四参数或对数-对数法绘制zui合适的标准曲线。浓度与OD值成反比关系，随着标准品浓度的增加，黄色强度就减少，即OD值减少
样本浓度可直接从标准曲线上读取。如果样本实验前进行了稀释，则zui后结果应乘以相应的稀释因子
标准曲线为逆向S型曲线美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。 美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
附：采用全自动酶标仪检测，只需检测前设置好酶标仪的相关参数，如坐标参数（线性，半对数）和计算方式参数（三次回归、四参数或双对数曲线方程），即可直接得到结果。美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
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贮存美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
收到货后贮存于4℃ 强烈建议尽快使用配制的试剂 1X缓冲液贮存于4℃ 将不用的微孔板放回至密封袋内密封起来，贮存于4℃ 已稀释的标准品，生物标记物，抗体和HRP贮存于4℃
样本采集的建议美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
血液采集美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
用含有EDTA的采血管采集血液，每管可装7ml，采到了抗凝血液后立即摇晃几次，将血液从采血管转至含抑肽酶的离心管，不断摇晃，抑制蛋白酶活性，1600xg转速，4℃下离心15min，，收集血浆，血浆样本可在-70℃下保存1个月。如果采血管可用于离心，可直接将抑肽酶加入至采血管内。美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
血浆中提取多肽美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。美国DRG中国*代理，生长激素释放因子ELISA试剂盒。
用等量的缓冲液A酸化血浆，如1ml的血浆加入1ml的缓冲液A，混匀，6000-17000xg下，4℃离心20min 分离柱内含200mg的C18，依次用缓冲液A（3ml ，3次）和缓冲液B（1ml，1次），使其平衡
注意：步骤3-5中不能对分离柱施加任何压力
将酸化的血浆倒入至预平衡的C18分离柱内 用缓冲液A（3ml，2次）慢慢洗柱，倒去洗液 用缓冲液B（3ml，1次）慢慢洗提多肽，收集至塑料管内 用离心浓缩机或其他方法将洗提液蒸干 将抽提物直接贮存于-20℃，并尽快进行试验，用1X的缓冲液直接配制。如果多肽浓度不在检测范围内，就直接进行稀释或浓缩
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